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蛋白免疫檢測技術
發布時間： 2025-05-20 點擊次數： 694次蛋白免疫檢測技術是基于抗原與抗體特異性結合的原理，用于檢測生物樣品中蛋白質的存在、含量、分布及相互作用的一類分析技術。這類技術具有高特異性、高靈敏度等特點，廣泛應用于醫學診斷、生物學研究、藥物開發等領域。以下是幾種常見的蛋白免疫檢測技術及其原理、應用和特點：
一、酶聯免疫吸附測定（ELISA）
原理
將抗原或抗體固定在固相載體（如微孔板）表面，通過酶標記的抗原或抗體與待測樣品中的目標蛋白結合，加入底物后酶催化顯色反應，通過吸光度值定量分析目標蛋白。
類型
應用
點
靈敏度高（pg-ng 級）、操作簡便、可高通量檢測。
缺點
可能存在非特異性結合，需設置嚴格對照；僅能檢測可溶性蛋白。
二、免疫印跡法（Western Blot，WB）
原理
應用
優點
缺點
操作步驟繁瑣，耗時較長；定量準確性低于 ELISA。
三、免疫熒光技術（Immunofluorescence，IF）
原理
用熒光素（如 FITC、Alexa Fluor）標記抗體，與細胞或組織中的目標蛋白結合，通過熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡觀察熒光信號，定位蛋白在細胞內的分布（如細胞膜、細胞質、細胞核）。
類型
應用
優點
直觀顯示蛋白空間分布，可實現多色標記（同時檢測多種蛋白）。
缺點
需熒光顯微鏡，樣品制備要求高；熒光信號可能隨時間衰減。
四、免疫組織化學技術（Immunohistochemistry，IHC）
原理
將組織樣本制成切片（如石蠟切片、冰凍切片），用抗體檢測組織中目標蛋白的定位和表達水平，通過酶顯色（如 DAB 顯色呈棕黃色）或熒光標記顯示結果。
應用
優點
保留組織形態學結構，便于結合病理特征分析。
缺點
結果判讀依賴經驗，定量準確性較低。
五、免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）
原理
應用
優點
缺點
需高親和力抗體，操作需優化避免非特異性結合。
六、流式細胞術（Flow Cytometry，FCM）
原理
應用
優點
缺點
需流式細胞儀，樣品需制備成單細胞懸液。
七、化學發光免疫分析（CLIA）
原理
應用
臨床檢測：激素（如甲狀腺激素）、腫瘤標志物的高靈敏度定量。
優點
靈敏度高于 ELISA（fg 級），自動化程度高，適合大規模檢測。
技術發展趨勢
這些技術各有側重，實際應用中需根據檢測目的（定性 / 定量 / 定位）、樣品類型（細胞 / 組織 / 體液）及靈敏度要求選擇合適的方法，或結合多種技術進行綜合分析。
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